技術(shù)簡介：2006年我國南方爆發(fā)的“高熱病”由Nsp2基因部分缺失的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）突變株引起，目前，該病幾乎已擴(kuò)散到全球所有養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的國家和地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)每年造成的損失達(dá)幾十億美元，成為近年來世界獸醫(yī)學(xué)界異常關(guān)注的疾病之一，因此PRRSV感染的早期檢測刻不容緩。一步反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Reverse transcription-1oop mediated isothermal amplification，RT-LAMP）具有特異、快速、靈敏、簡便的特點(diǎn)，可用于PRRSV早期快速檢測，并因簡單易行，適于基層和現(xiàn)場檢測。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(，LAMP)技術(shù)是近年來發(fā)展出的一種敏感、特異、方便快捷的核酸擴(kuò)增技術(shù)。與傳統(tǒng)PCR方法相比，LAMP不需要熱循環(huán)，為等溫?cái)U(kuò)增。且由于LAMP反應(yīng)中產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物一白色焦磷酸鋏沉淀，也可用結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料SYBR Green I染色，擴(kuò)增產(chǎn)物可不經(jīng)過電泳，通過肉眼觀察或濁度計(jì)或紫外燈即可判定結(jié)果。因此LAMP是一種不需要熱循環(huán)儀、肉眼即可判定結(jié)果的高度特異和敏感的DNA擴(kuò)增方法。該方法具有特異性強(qiáng)、等溫靈敏、操作簡單、產(chǎn)物易檢測等優(yōu)點(diǎn)，適合于現(xiàn)場、戰(zhàn)時(shí)野外或條件較差的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原微生物的快速檢測。

該方法采用能特異識(shí)別靶序列上6個(gè)位點(diǎn)的4條引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)，在恒溫條件(60-65℃)，進(jìn)行核酸的指數(shù)級擴(kuò)增，在45-60 min的時(shí)間里其擴(kuò)增效率可達(dá)到109-1010個(gè)數(shù)量級，結(jié)果可以直接肉眼觀察，不需要特殊儀器設(shè)備，適合于現(xiàn)場、戰(zhàn)時(shí)野外或條件較差的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原微生物的快速檢測。

技術(shù)來源：國家科技計(jì)劃

單位名稱：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所

地 址：北京市海淀區(qū)中關(guān)村南大街12號 郵編：100081

聯(lián) 系 人：朱鴻飛

電 話：010-68919855

電子郵件：bioclub@vip.sina.com